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1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,單擊此處編輯母版標題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,第八章,化妝品的微生物學檢查,1,化妝品的衛(wèi)生標準,化妝品微生物學檢查基礎知識,化妝品中微生物總數檢查,化妝品中控制菌檢查,2,一、,2007,版“化妝品衛(wèi)生規(guī)范”,粘膜用、嬰兒及兒童

2、用化妝品,眼部及口唇等,細菌菌落總數,不得大于,500CFU/mL,或,500CFU/g,。,其他化妝品,細菌菌落總數,不得大于,1000CFU/mL,或,1000CFU/g,3,所有化妝品,霉菌和酵母菌總數,不得大于,100CFU,mL,或,100CFU,g,每克或每毫升產品中不得檢出,糞大腸菌群,、,銅綠假單胞菌,和,金黃色葡萄球菌,。,4,二、檢查的必備知識,1.,采樣,采樣應具有代表性。從兩個包裝單位以上的樣品中共取,10g,或,10mL,作為檢驗量。,樣品應嚴格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應有破裂，在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。,接到樣品后，應立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡

3、快檢驗。及時檢驗的樣品應放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。,5,二、檢查的必備知識,1.,采樣,若樣品需同時做多種分析，如細菌、毒理、化學等，則宜先取出部分樣品做細菌檢驗，再將剩余樣品做其它分析。,在檢驗過程中，從打開包裝到全部檢驗操作結束，均須防止微生物的再污染和擴散，所用器皿及材料均應事先滅菌，全部操作應在無菌室內進行，或在相應條件下，按無菌操作規(guī)定進行。,6,二、檢查的必備知識,1.,采樣,如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應保存一個月。,7,二、檢查的必備知識,2.,供檢樣品（供試品）的制備,水溶性液體樣品,樣品,10mL,90mL,生理鹽水,1:10,供

4、試液,8,二、檢查的必備知識,2.,供檢樣品（供試品）的制備,油性液體樣品,5mL,滅菌液體石蠟,1:10,供試液,均質器,10mL,滅菌吐溫,80,4044,10mL,樣品,混勻,10min,75mL 4044,滅菌生理鹽水,4044,乳化,9,二、檢查的必備知識,2.,供檢樣品（供試品）的制備,親水性半固體（膏、霜、乳劑）樣品,振蕩,90mL,生理鹽水,上清液作為,1:10,供試液,10g,樣品,15min,膏、霜劑若用均質器，混合均質,12min,即可。,10,二、檢查的必備知識,2.,供檢樣品（供試品）的制備,疏水性半固體樣品,10mL,滅菌液體石蠟,1:10,供試液,均質器,10mL

5、,滅菌吐溫,80,4044,10g,樣品,混勻,10min,70mL 4044,滅菌生理鹽水,4044,乳化,膏、霜劑若用均質器，混合均質,35min,即可。,11,二、檢查的必備知識,2.,供檢樣品（供試品）的制備,固體樣品,振蕩,90mL,生理鹽水,上清液作為,1:10,供試液,10g,樣品,15min,12,三、細菌、真菌總數檢查,1.,意義,測定總數主要是作為判定化妝品被細菌、霉菌及酵母菌污染程度的標記，也可以觀察化妝品中細菌、霉菌及酵母菌的性質和在化妝品中的繁殖動態(tài)，以便對樣品進行衛(wèi)生學評價時提供科學依據。,13,三、細菌、真菌總數檢查,2.,培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間,檢查菌,培養(yǎng)基名

6、稱,培養(yǎng)溫度,培養(yǎng)時間,細菌,卵磷脂、吐溫,80-,營養(yǎng)肉湯瓊脂,36,1,48h,2h,真菌,虎紅瓊脂,28,2,72h,2h,14,三、細菌、真菌總數檢查,3.,方法平皿法,數據,處理,混合平板的制備,細菌、真菌的培養(yǎng),檢查結果、觀察與計數,供試液,的制備,書寫檢驗,記錄單,15,細菌、霉菌和酵母菌計數的操作過程,10,-1,10,-2,10,-2,10,-1,10,-1,10,-2,10,-2,10,-1,對照,對照,對照,對照,1.0ml,倒置培養(yǎng),48h1h,36,1,卵磷脂、吐溫,80-,營養(yǎng)肉湯瓊脂,28,2,虎紅瓊脂,倒置培養(yǎng),72h2h,9.0ml,稀釋液,10g/ml,供試

7、品,9.0ml,10,-2,10,-1,1.0ml,16,三、細菌、真菌總數檢查,4.,操作注意事項,1.,盡量使菌細胞分散開，使每個菌細胞生成一個菌落，否則將會導致重大的技術誤差。,2.,為防止細菌增殖及產生菌苔，制成供試液后，應盡快稀釋，注皿。一般稀釋后應在,1,小時內操作完畢。,17,三、細菌、真菌總數檢查,4.,操作注意事項,3.,使用吸量管時，應小心沿管壁加入，不用觸及管內溶液，以防吸管尖端外側黏附的溶液混入其中。,4.,注意抑菌現象。由于防腐劑未被中和，往往使平板計數結果受影響，如低稀釋時菌落少。而高釋釋度時菌落數反而增大。遇此情況應重復檢驗，以確定是防腐劑影響還是操作技術誤差。,

8、18,三、細菌、真菌總數檢查,4.,操作注意事項,5.,為檢查和控制滅菌效果，應做空白對照，以檢驗所使用的物品是否徹底滅菌及檢驗過程是否無菌操作。,6.,為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每,100mL,卵磷脂吐溫,80,營養(yǎng)瓊脂中加入,1mL0.5,的,TTC,溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。,19,三、細菌、真菌總數檢查,5.,菌落計數及報告方法,宜選取細菌、酵母菌平均菌落數,30300,之間、霉菌平均菌落數,550,之間的稀釋級，作為菌數報告（取兩位有效數字）的依據。,（,1,）,當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數,;

9、,（,2,）若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在,30,個,300,個之間，則應求出兩菌落總數之比值來決定，若其比值小于或等于,2,，應報告其平均數，若大于,2,則報告其中稀釋度較低的平皿的菌落數,20,三、細菌、真菌總數檢查,5.,菌落計數及報告方法,（,3,）,若所有稀釋度的平均菌落數均大于300 個，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之,;,（,4,）若所有稀釋度的平均菌落數均小于,30,個，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之,;,（,5,）若所有稀釋度的平均菌落數均不在,30,300,個之間，其中一個稀釋度大于,300,個，而相鄰的另一稀釋度小于,30,個時，則以接近

10、,30,或,300,的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之；,（,6,）若所有的稀釋度均無菌生長，報告數為每,g,或每,mL,小于,10CFU;,21,例次,不同稀釋度平均菌落數,兩稀釋度,菌數之比,菌落總數,(CFU/mL,或,CFU/g),報告方式,(CFU/mL,或,CFU/g,),10,-1,10,-2,10,-3,1,1365,164,20,-,16400,16000,或,1.6*10,4,2,2760,295,46,1.6,38000,38000,或,3.8*10,4,3,2890,271,60,2.2,27100,27100,或,2.7*10,4,4,不可計,4650,513,-,513

11、000,513000,或,5.1*10,5,5,27,11,5,-,270,270,或,2.7*10,2,6,不可計,305,12,-,30500,31000,或,3.1*10,4,7,0,0,0,-,1*10,22,四、控制菌檢查,檢查項目,（,1,）,陰性對照,試驗：應無菌生長。,（,2,）,陽性對照,試驗：供試品,+,陽性對照菌，應檢出相應的陽性對照菌。,（,3,）,供試品,控制菌檢查：依相應的檢查方法進行。,23,四、控制菌檢查,檢查流程,供試品,增菌培養(yǎng),分離培養(yǎng),純培養(yǎng),染色鏡檢,生化反應試驗,報告結果,24,四、控制菌檢查,檢查流程,1.,增菌培養(yǎng)目的,使被檢藥物中的被檢菌增殖，

12、避免出現漏檢。,25,四、控制菌檢查,檢查流程,2.,分離培養(yǎng)目的,經增殖培養(yǎng)后,被檢菌大量繁殖，同時其他一些雜菌也出現增殖。因此分離培養(yǎng)能使目的菌從混合菌中分離出來。,26,四、控制菌檢查,檢查流程,3.,純培養(yǎng)目的,只是大量增殖被檢菌，用于后面的進一步檢驗。,27,四、控制菌檢查,檢查流程,4.,染色鏡檢目的,初步鑒定，觀察細菌的形態(tài)大小。,28,四、控制菌檢查,檢查流程,5.,生化試驗目的,最終的鑒定依據，結合染色鏡檢得出實驗結果，填寫檢驗報告。,29,四、控制菌檢查,糞大腸菌群檢查,糞大腸菌群,糞大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧,革蘭氏陰性,無芽胞桿菌，在,44.50.5,培養(yǎng),24h,4

13、8h,能發(fā)酵乳糖,產酸并產氣,。,30,四、控制菌檢查,糞大腸菌群檢查,糞大腸菌群檢查意義,糞大腸菌群主要存在于溫血動物糞便中，隨糞便排出體外后可直接污染化妝品，若產品中檢出該菌群，表明該產品受到糞便污染，可能存在腸道致病菌并引起疾病，是評價化妝品衛(wèi)生質量的重要指標之一。,31,四、控制菌檢查,糞大腸菌群檢查,產酸：黃色,產氣：氣泡,產酸產氣,書寫檢驗,記錄單,不產酸不產氣,增菌培養(yǎng),供試液的制備,配培養(yǎng)基和稀釋液,檢查結果判斷,44 0.5,2428h,分離培養(yǎng),蛋白胨水培養(yǎng),最終結果判斷,44 0.5,24,2h,靛基質,特征菌落,361,1824h,雙倍膽鹽乳糖,M,EMB,瓊脂,液面玫

14、瑰紅色,紫黑色,糞大腸菌群檢查流程圖,32,雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基,EMB,瓊脂培養(yǎng)基,靛基質試驗,氣泡，培養(yǎng)基呈黃色,紫黑色金屬光澤,玫瑰紅色液面,33,四、控制菌檢查,糞大腸菌群檢查,糞大腸菌群檢查結果報告,根據發(fā)酵乳糖產酸產氣，平板上有典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質試驗陽性，則可報告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。,34,四、控制菌檢查,銅綠假單胞菌檢查,銅綠假單胞菌,銅綠假單胞菌屬于假單胞菌屬，為,革蘭氏陰性,桿菌，,氧化酶陽性,，能產生,綠膿菌素,。此外還能,液化明膠,，,還原硝酸鹽,為亞硝酸鹽，在,421,條件下能生長。,35,四、控制菌檢查,銅綠假單胞菌檢查,銅綠假單胞菌檢查

15、意義,銅綠假單胞菌在特殊情況下可引起皮膚化膿感染、泌尿道感染、中耳炎等。外傷及燒傷患者感染后最易引起化膿，并引起敗血癥。為保證消費者安全，化妝品中不得檢出銅綠假單胞菌。,36,四、控制菌檢查,銅綠假單胞菌檢查,最終結果判斷,增菌培養(yǎng),供試液的制備,書寫檢驗,記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,革蘭染色、鏡檢,氧化酶試驗,綠膿菌素試驗,生化試驗 硝酸鹽還原試驗,42,生長試驗,明膠液化試驗,銅綠假單胞菌檢查流程圖,SCDLP,培養(yǎng)基,十六烷三甲基溴化銨瓊脂,361,1824h,361,1824h,特征菌落,灰白色、扁平、周圍有水溶性藍綠色素,37,十六烷三甲基溴化銨平板,SC

16、DLP,培養(yǎng)基,黃綠色菌膜,灰白色濕潤,氧化酶試驗,粉紅,/,紫紅色,38,綠膿菌素試驗,鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色,硝酸鹽還原產氣試驗,N,2,明膠液化試驗,明膠培養(yǎng)基（高層）,明膠液化,39,四、控制菌檢查,銅綠假單胞菌檢查,銅綠假單胞菌檢查結果報告,被檢樣品經增菌分離培養(yǎng)后，經證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和,42,生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。,40,四、控制菌檢查,金黃色葡萄球菌檢查,金黃色葡萄球菌,金黃色葡萄球菌為,革蘭氏陽性球菌,，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能,分解甘露醇,，,血漿凝固酶陽性,。,41,四、控制菌檢查,金黃色葡萄球菌檢查,金黃色葡萄球菌檢查意義,金黃色葡萄球菌在外界分布較廣，抵抗力也較強，能引起人體局部化臟性病灶，嚴重時可導致敗血癥，因此化妝品中檢驗金黃色葡萄球菌有重要意義。,42,四、控制菌檢查,金黃色葡萄球菌檢查,革蘭染色、鏡檢,生化試驗,:,血漿凝固酶試驗,甘露醇發(fā)酵試驗,最終結果判斷,增菌培養(yǎng),供試品的處理,書